Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型白血病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身病原微到显现出1M-哮喘临床征状的成效率在成人时期就有不太好的详细描述，多个呼吸道自身病原微白血病的成人记事70%在肝细胞转成后10年内罹患哮喘，而随访15年的成人这一百份减小到84%。相对来说之下，占临床1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的胃癌机制还不会得到适当的数据研究。

日益多的人开始应以用于分期控制系统来概念1M-哮喘的成效：生物微在显现出多种呼吸道自身病原微时转到第1期中，显现出血糖异常时转到第2期中，显现出征状时转到第3期中。一些多发呼吸道自身病原微白血病的生物微，在1期和2期，成效较极快，并演进为胃癌的1M-哮喘。我们前详细描述了第一组合成在首次扫描到多种呼吸道自身病原微试样后最更少10年无哮喘的极极快成效者，这第一组征状人数更少，但特点颇为指明。随后，我们见到呼吸道自身蛋白特异性CD8+T细胞膜反应以在成效较极快的征状中都基本不存在，但在近期胃癌和长时间存在的哮喘征状中都很难以扫描到。这可能确实，与成效征状相对来说，这些征状自身免疫反应以的抑制增强。

更早数据研究确实，尽管抑制性T细胞膜(Treg)数量正常，但哮喘征状存在一些动态缺失，其中都之外对IL-2的反应以能力增大。此外，哮喘征状中都的波动CD4+T细胞膜可能对抑制凸显抵抗性，表现为波动T细胞膜的诱发西移动，其本质产生的Treg和粘液产生的抑制Treg，以及蛋白亲身经历的CD4+T细胞膜中都IL-2反应以西移动。本数据研究的目的是详细描述了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在海岸边极较极快成效者中都的特点，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX数据研究是一项以人群进一步将的纵向数据研究，在21岁不限确诊的征状亲属中都检查1M-哮喘的危险因素。我们前详细描述了长时间较极快成效者的特点，他们依然多重呼吸道自身病原微白血病多达10年，但不会显现出哮喘的临床征状，极快性或非癫痫自身免疫。随后，10名继续依然无哮喘并愿意提供大量血液试样的较极快成效者延展到T和B细胞膜动态研究。在目前的数据研究中都，8名极快成效者(SP第一组)，中都位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的呼吸道自身病原微白血病。所有的发起者都属于1M-哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身病原微对某些蛋白的白血病反应以，然而，一名征状已经属于2期最更少6年，但不会显现出临床征状，一名征状被诊疗为哮喘，该测试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中都对该NAD顺利完成了直接评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，转用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜诱发筛选评估NAD中都Treg的高频率、表M-和动态。应以用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和复出)顺利完成无指导聚类研究，评估Treg表M-。

结果：与卫生NAD相对来说，来自极快成效微的思绪CD4+T细胞膜的指导聚类结果显示，转录的思绪CD4+ Treg高频率减小，与低剂量抑制的TNFR涉及蛋白(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升高的征状与成效较极快者和也就是说的对照第一组相对来说，Treg谱有所相同。动态研究确实，与卫生NAD相对来说，来自较极快成效微的Treg介导的CD4+波动T细胞膜诱发明显受损。表现为对波动CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的诱发减小。

左图1 深入的表M-研究结果显示，CD4+Treg亚M-在极快成效队列中都减小。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标上物解读深入研究出10个元簇:思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应以用于9个相同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个终端代表一个一个大(100个一个大)，更多的元一个大(10个元一个大)在终端第一组周围手工。每个终端中都的糕左图对此单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热左图，以结果显示整微标上解读。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)作用于左图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱直通左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞膜(l)。蓝色圆圈代表捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon第一组合成符号秩筛选。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应以用于CITRUS的预测模M-证实，Treg高频率的减小是成效较极快的左图案。分级制度离子通道(a - f)和柑橘研究(g-k)比较SP发起者和也就是说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADSP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的高频率综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的箱直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度渐变，箭头引人注目的簇被比对为SP和HD队列中间的相同。(j)箱直通左图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比较丰度(百份)。(k)直方左图结果显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标上比较解读与故事情节解读(红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇中都标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon第一组合成符号秩筛选

左图3 与卫生献血者相对来说，成效较极快者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T细胞膜元簇(思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热左图(sp606不之外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方左图(c)和综合左图(d)。Wilcoxon第一组合成符号秩和筛选，p< 0.07(蓝色)所有NAD之外，p< 0.05(红色)NADSP 606和也就是说的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从分级制度离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(蓝色)串联，结果显示直方左图(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon第一组合成符号秩筛选

左图4 来自较极快成效的CD4+ treg细胞膜控制波动CD4+T细胞膜的能力增大。SP第一组用红色的直通和圆圈对此，HD第一组用红色的直通和圆圈对此，蓝色的直通/圆圈对此NADsp606。应以用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按仔细观察的百份滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，指导3天后顺利完成流式细胞膜法术扫描。(a-d)与CD4+需要的话者比较应以的treg指导(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。应以用于白血病对照(转录的响应以细胞膜分别为treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 波动CD4+T细胞膜对较极快成效的T细胞膜重置的诱发更敏感。SP第一组用红色的直通和圆圈对此，HD第一组用红色的直通和圆圈对此，蓝色的直通/圆圈对此NADsp606。应以用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按仔细观察的百份滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞膜，指导3天后顺利完成流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者携手指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自较极快成效子的重置思绪CD4+Treg在GITR解读中都得到了延展和丰富，阐释了进一步数据研究Treg在1M-哮喘风险生物微中都的表征的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28